價(jià) 格：詢價(jià)
規(guī) 格：25ml/100ml/500ml/1L/5L/20L
產(chǎn) 地：中國
貨 號：HQ060313001L
品 牌：匯研生物
為確保產(chǎn)品的性能和無憂的操作，使用前請仔細(xì)閱讀本手冊，有任何疑問請咨詢本公司售后技術(shù)支持或當(dāng)?shù)氐匿N售人員（聯(lián)系方式見附錄）。
1.產(chǎn)品介紹
Ni Focurose FF (TED）是利用Ni2+與蛋白質(zhì)側(cè)鏈上的某些氨基酸(主要為組氨酸、半胱氨酸、色氨酸)相互作用而進(jìn)行分離純化，適用于His標(biāo)簽蛋白及與Ni2+具有相互作用的生物分子的分離純化。強(qiáng)螯合的Ni2+可以直接用于真核表達(dá)系統(tǒng)分泌表達(dá)的His標(biāo)簽蛋白且耐受更高的還原劑、螯合劑，無需進(jìn)行樣品前處理；介質(zhì)的清洗再生工作簡單，無需脫鎳直接進(jìn)行NaOH清洗。
特點(diǎn)：
a.快速、簡單（一步純化）。
b.耐受更高的還原劑、螯合劑，真核分泌表達(dá)的His標(biāo)簽蛋白無需前處理即可上樣，最大限度的保護(hù)蛋白活性。
c.無需脫鎳，直接進(jìn)行NaOH清洗，大大縮短了清洗周期。
d.鎳脫落比傳統(tǒng)Ni Focurose FF (IDA）和Ni Focurose FF (IMAC）更低，無需反復(fù)再生。
表1：Ni Focurose FF（TED）性能參數(shù)
基質(zhì) | 高度交聯(lián)6%的瓊脂糖 |
粒徑范圍 | 45-165μm |
平均粒徑 | 90±5μm |
結(jié)合載量 | ≥10mg(His標(biāo)簽蛋白)/ml(介質(zhì)) |
pH穩(wěn)定性 | 3-12（工作）2-14（清洗） |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 0.01M鹽酸、0.01M氫氧化鈉（一周） 20mM EDTA、10mM DTT、1M氫氧化鈉、8M尿素、6M鹽酸胍(24小時(shí)) 100mM EDTA、0.5M 咪唑（2小時(shí)） 30% 異丙醇（20分鐘） |
兼容性 | 所有在Ni Focurose FF（IMAC）中正常使用的溶液 |
流速 | ≧300cm/h |
操作壓力 | ≤0.3MPa |
貯存溶液 | 20%乙醇 |
貯存溫度 | 4-30℃ |
2.溶液制備
平衡液：0.02M PB、0.5M NaCl、0.005-0.01M Imidazole，pH 7.4。
洗脫液：0.02M PB、0.5M NaCl、0.5M Imidazole，pH 7.4。
備注：當(dāng)純化包涵體時(shí)，溶液中要添加8M Urea或6M Gua-HCl；包涵體變性后純化會出現(xiàn)結(jié)合力降低，從而導(dǎo)致不結(jié)合。
3.樣品制備
3.1樣品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液進(jìn)行裂解、透析/超濾/G25進(jìn)行緩沖液置換。
3.2樣品過濾（平均粒徑<45μm，用0.22μm過濾；45μm<平均粒徑<165μm，用0.45μm過濾；平均粒徑>165μm，用 0.8μm過濾）。
4.純化流程（以XK16/10為例）
采用液滴對液滴（避免引入氣泡）的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。
4.2 用純化水以5ml/min的流速沖洗5個(gè)CV。
4.3 用洗脫液以5ml/min的流速沖洗5個(gè)CV。
4.4 用平衡液以5ml/min的流速沖洗10個(gè)CV。
4.5 將樣品以5ml/min的流速上樣。
4.6 用平衡液以5ml/min的流速沖洗至紫外吸收值平穩(wěn)（10-15個(gè)CV）。
4.7 用洗脫液以5ml/min的流速洗脫5CV或20CV(階梯式洗脫5CV/線性梯度洗脫20CV)。
5.清洗（以XK16/10為例）
5.1 用純化水以5ml/min的流速沖洗10個(gè)CV。
5.2 用1.5M NaCl以5ml/min的流速沖洗10個(gè)CV。
5.3 用純化水以5ml/min的流速沖洗10個(gè)CV。
5.4 用1.0M NaOH以2.5ml/min的流速沖洗30個(gè)CV。
5.5 用平衡液以5ml/min的流速沖洗10個(gè)CV。
5.6 用純化水以5ml/min的流速沖洗10個(gè)CV。
5.7 用30%異丙醇以2.5ml/min的流速沖洗10個(gè)CV。
5.8 用純化水以5ml/min的流速沖洗10個(gè)CV。
5.9 用平衡液以5ml/min的流速沖洗5個(gè)CV。
5.10用20%乙醇以5ml/min的流速沖洗5個(gè)CV。
6.常見問題
表2：常見問題及解決方案
問題 | 可能原因 | 解決方案 |
純化時(shí)目標(biāo)物不與介質(zhì)結(jié)合 或結(jié)合量較低 | 1.上樣量過載 | 降低上樣量 |
2.上樣流速過快 | 降低上樣流速 | |
3.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集影響結(jié)合 | 及時(shí)有效地清洗介質(zhì)或更換新的介質(zhì) | |
4.表達(dá)條件過于劇烈,His標(biāo)簽被包裹，不能與介質(zhì)結(jié)合 | 建議做一個(gè)空載體作為表達(dá)和純化的對照，確定表達(dá)條件是否合適 | |
5.初始樣品中沒有組氨酸標(biāo)簽蛋白 | 通過基因序列或His標(biāo)簽抗體核實(shí) | |
6.目標(biāo)蛋白出現(xiàn)在流穿中 | 目標(biāo)蛋白沒有成功表達(dá)或樣品與平衡液中pH及組分不正確 | |
洗脫時(shí)沒有收集到目標(biāo)物 或只收集到少量目標(biāo)物 | 1.目標(biāo)物沒有與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較少 | 先確認(rèn)目標(biāo)物是否與介質(zhì)結(jié)合 |
2.洗脫條件不合適 | 加大洗脫液中咪唑濃度 | |
3.洗脫時(shí)間不夠 | 降低流速，延長洗脫液的保留時(shí)間 | |
4.洗脫體積過小 | 加大洗脫體積 | |
5.洗雜時(shí)，目的蛋白被洗下來 | 降低洗雜液中的咪唑濃度 | |
6.目標(biāo)物在洗脫液條件下出現(xiàn)聚集沉淀 | 檢測目標(biāo)物在洗脫液條件（pH和鹽濃度）下的溶解度和穩(wěn)定性。可以嘗試在洗脫液中加入一些添加劑：如0.2% Triton X-100或0.5% Tween 20 | |
目標(biāo)物純度較低
| 1.樣品沒有經(jīng)過前處理 | 樣品上柱前必須要經(jīng)過離心或過濾 |
2.樣品粘度過高 | 用平衡液適當(dāng)?shù)南♂寴悠?，降低粘度?/span> | |
3.洗雜不徹底 | 加大洗雜體積直至基線平穩(wěn)并與平衡液一致 | |
4.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集沉淀 | 及時(shí)有效地清洗介質(zhì) | |
5.雜質(zhì)與Ni2+具有較高的親和力。 | 用其它類型介質(zhì)進(jìn)行純化（如離子或分子篩） | |
6.目標(biāo)物出現(xiàn)降解 | 檢測目標(biāo)物的穩(wěn)定性并加入蛋白酶抑制劑 | |
7.柱料裝填效果不佳 | 重新裝填或購買 | |
8.雜質(zhì)與介質(zhì)出現(xiàn)非特異性吸附 | 適當(dāng)選擇添加劑降低非特異性吸附,可以嘗試在樣品中加入一些添加劑：如0.5%Triton X-100、1.0% Tween 20或50%甘油 | |
9.分離柱頂部有較大儲樣體積 | 重新裝柱或降低儲樣體積 | |
10.介質(zhì)中有微生物生長 | 介質(zhì)使用完后，請及時(shí)正確保存介質(zhì) | |
介質(zhì)載量下降 | 1.上樣流速過快 | 降低上樣流速 |
2.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集，導(dǎo)致載量下降。 | 及時(shí)清洗介質(zhì) | |
3.使用次數(shù)過多 | 更換新介質(zhì) | |
4.表達(dá)條件過于劇烈,His標(biāo)簽被包裹，不能較好與介質(zhì)結(jié)合 | 建議做一個(gè)空載體作為表達(dá)和純化的對照，確定表達(dá)條件是否合適 | |
色譜峰上升過陡 | 介質(zhì)裝填過緊 | 重新裝柱 |
色譜峰上升過緩或拖尾 | 介質(zhì)裝填太松 | 重新裝柱 |
柱床有裂縫或干涸 | 出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入 | 檢查管路是否有泄露或氣泡，重新裝柱 |
液流較慢 | 1.蛋白或脂類聚集 | 及時(shí)清洗介質(zhì)或?yàn)V膜 |
2.蛋白沉淀在介質(zhì)中 | 調(diào)整平衡液和洗脫液組分，以維持目標(biāo)物的穩(wěn)定性和介質(zhì)的結(jié)合效率 | |
3.分離柱中微生物生長 | 所用試劑必須經(jīng)過過濾和脫氣； 樣品上柱前必須離心或過濾 |
7.訂購信息
表3：訂購信息表
產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 貨號 |
Ni Focurose FF（TED） | 25ml | HQ060313025M |
Ni Focurose FF（TED） | 100ml | HQ060313100M |
Ni Focurose FF（TED） | 500ml | HQ060313500M |
Ni Focurose FF（TED） | 1L | HQ060313001L |
Ni Focurose FF（TED） | 5L | HQ060313005L |
Ni Focurose FF（TED） | 20L | HQ060313020L |
備注：大規(guī)格包裝產(chǎn)品或其它產(chǎn)品購買，請咨詢本公司當(dāng)?shù)劁N售或售前技術(shù)支持。
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