少女哔哩哔哩视频在线看免费,国产精品嫩草AV城中村,国产农村妇女精品一二区,蜜桃秘 av无码一区二区三区,免费观看成人毛片A片直播千姿

常見(jiàn)問(wèn)題FAQ
當(dāng)前位置: 首頁(yè) > 常見(jiàn)問(wèn)題FAQ

聯(lián)系我們Contact Us

凝膠過(guò)濾介質(zhì)_離子交換介質(zhì)_親和層析介質(zhì)-武漢匯研生物科技有限公司

咨詢(xún)電話(huà):027-8777 2229

傳真:027-8777 2229

客服QQ:3300979818,2693496005

電子郵箱:huiyanbio@126.com




                                                                                       填料基本知識(shí)方面

序號(hào)

 客戶(hù)問(wèn)題

匯研答案

 1

 為什么純化時(shí)目標(biāo)物不與介質(zhì)結(jié)合,或結(jié)合量較低?

1.上樣量過(guò)載,降低上樣量,2.上樣速度過(guò)快,降低上樣流速,3.蛋白或脂類(lèi)在介質(zhì)中聚集,及時(shí)有效地清洗介質(zhì)或更換新的介質(zhì),4.目標(biāo)物不帶電或與介質(zhì)帶同樣的電荷,篩選合適的結(jié)合緩沖液,5.樣本或平衡液中鹽濃度和pH不正確,檢查樣品和平衡液中的電導(dǎo)和pH,6.選用了錯(cuò)誤的緩沖液,參考緩沖液選擇表,7.樣品中加入了不合適的去污劑,檢查樣品中是否有不合適的去污劑

 2

 洗脫時(shí)沒(méi)有收集到目標(biāo)物,或只收集到少量目標(biāo)物,怎么辦?

1.目標(biāo)物沒(méi)有與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較少,先確認(rèn)目標(biāo)物是否與介質(zhì)結(jié)合,2.洗脫條件不合適,洗脫液洗脫能力不夠,加大鹽濃度和調(diào)整洗脫液pH,3.洗脫時(shí)間不夠,降低流速,延長(zhǎng)洗脫液的保留時(shí)間,4.洗脫體積過(guò)小,加大洗脫體積,5.目標(biāo)物在洗脫液條件下出現(xiàn)聚集沉淀,檢測(cè)目標(biāo)物在洗脫液條件(鹽濃度和pH)下的溶解度和穩(wěn)定性。

 3

 目標(biāo)物純度較低怎么辦?

1.樣品沒(méi)有經(jīng)過(guò)前處理,樣品上柱前必須要經(jīng)過(guò)離心或過(guò)濾,2.樣品粘度過(guò)高,用平衡液適當(dāng)?shù)南♂寴悠?,降低粘度?.洗雜不徹底,加大洗雜體積直至基線(xiàn)平穩(wěn)并與平衡液一致,4.雜質(zhì)蛋白或脂類(lèi)在介質(zhì)中聚集沉淀,及時(shí)有效地清洗介質(zhì),5.洗脫條件不佳,優(yōu)化洗脫條件,6.目標(biāo)物出現(xiàn)降解,檢測(cè)目標(biāo)物的穩(wěn)定性,7.柱料裝填效果不佳,重新裝填或購(gòu)買(mǎi),8.分離柱頂部有較大儲(chǔ)樣體積,重新裝柱或降低儲(chǔ)樣體積,9.介質(zhì)中有微生物生長(zhǎng),介質(zhì)使用完后,請(qǐng)及時(shí)正確保存介質(zhì)

 4

 哪些因素會(huì)引起介質(zhì)載量下降?

1.上樣速度過(guò)快,降低上樣流速,2.蛋白或脂類(lèi)在介質(zhì)中聚集,導(dǎo)致載量下降,及時(shí)清洗介質(zhì),3.使用次數(shù)過(guò)多,配基被氧化或脫落,及時(shí)清洗介質(zhì)或更換新介質(zhì)

 5

 什么原因會(huì)造成色譜峰上升緩慢?

介質(zhì)裝填太松,重新裝柱

 6

 什么原因會(huì)引起色譜峰拖尾?

介質(zhì)裝填太松,重新裝柱

 7

 引起柱床有裂縫或干涸的原因有哪些?

出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入,檢查管路是否有泄露或氣泡,重新裝柱

 8

  液流較慢,怎么辦?

1.蛋白或脂類(lèi)聚集,及時(shí)清洗介質(zhì)或?yàn)V膜,2.蛋白沉淀在介質(zhì)中,調(diào)整平衡液和洗脫液組分,以維持目標(biāo)物的穩(wěn)定性和介質(zhì)的結(jié)合效率,3.分離柱中微生物生長(zhǎng),所用試劑必須經(jīng)過(guò)過(guò)濾和脫氣;

 9

  柱子管路有氣泡,如何處理?

柱管里面沒(méi)有問(wèn)題,那是壓柱的時(shí)候溢出來(lái)的。
1.注射器吸滿(mǎn)純化水,將注射器針頭插入內(nèi)管,嘗試一下看能不能把氣泡趕出來(lái)。
2.把填料頂部刻度標(biāo)記好,連接柱頭管路到層析系統(tǒng),以1ml/min流速開(kāi)啟,同時(shí)緩慢松開(kāi)柱頭密封圈,當(dāng)氣泡排盡后,重新壓柱。
3.重裝。
上述操作都需要測(cè)柱效合格后才能使用

10

  客戶(hù)反映柱底分布器有漏液情況,怎么處理?

若是新柱底分布器,則檢查柱底分布器篩板和柱內(nèi)套桿是否有松動(dòng);若不是,則檢查是否有密封圈老化的可能。最后檢查篩網(wǎng)是否有破損

 11

  Bio-Gel P-100填料,16/70裝柱,柱高50-60cm,流速0.2ml/min下,下出口收集液有膠的存在

該款填料耐壓較低,不適合裝得較高,后換用16/20的柱子,裝柱高度在13cm,流速0.12ml/min壓柱,控制壓力在0.1MPa以?xún)?nèi),沒(méi)有漏膠情況出現(xiàn)。

 12

  裝柱有什么要求?Ni柱裝柱高度?CHAPS是什么?

將填料攪拌均勻,裝的時(shí)候?qū)⑻盍蠅壕o,要保證里面沒(méi)有氣泡。Ni柱裝柱高度一般是20-30cm,最好不要超過(guò)50cm。CHAPS是兩性離子非變性去垢劑。

 13

  5ml預(yù)裝柱直徑及高度是多少?

空柱5ml直徑17mm. 高37mm,空柱1ml直徑8mm.高37mm

 14

 p100裝填16/70的柱子存在漏膠問(wèn)題,怎么處理?

對(duì)于p100裝16/70柱的項(xiàng)目,我們裝柱過(guò)程中發(fā)現(xiàn)膠面始終不穩(wěn)定,有往下降,流出液中有膠,用的新柱子,分布器濾膜也未出現(xiàn)異常情況,從以上情況判斷,16/70柱不適合裝p100填料。

 15

 某蛋白分子量約800kda,用Q柱純化能否掛柱?

離子柱,調(diào)節(jié)好PH值都能掛柱。只是分子量大的蛋白,空間結(jié)構(gòu)復(fù)雜的蛋白,載量會(huì)相應(yīng)的變低。但不影響正常的掛柱洗脫

 16

 5ml預(yù)裝柱,用的時(shí)候上頂蓋噴出來(lái)了,該怎么辦?

這種情況是由于反壓過(guò)大造成的。5ml預(yù)裝柱的材料耐壓0.5MPa,但是一般壓力超過(guò)0.15就可能出現(xiàn)這種情況。建議客戶(hù)重新裝柱后減小流速或者稀釋樣品再上樣。




                                                                                        填料應(yīng)用方面

序號(hào)

客戶(hù)問(wèn)題

匯研答案

 1

 目的蛋白6OKD,雜蛋白大于120KD,如何選擇分子篩填料?

建議選擇200PG,用16/70的柱子。

 2

 用來(lái)分離纖維低聚糖單體你們哪款單體比較合適???

這個(gè)屬于小分子分離純化了,硬膠更適合一些,聚丙烯酰胺凝膠柱。我們的產(chǎn)品推薦用陽(yáng)離子交換填料試一下。

 3

 像我們1cm*20cm的柱子大概需要多少Sephadex  G-25填料呀?

3.14×0.5×0.5×20=15.7ml  我們的G25是干粉,溶脹系數(shù)4-6倍,按照這個(gè)比例,只需要3-5g就夠了   

 4

 分離多肽比較常用的是哪些產(chǎn)品呀?

我們這邊有客戶(hù)走到生產(chǎn)級(jí)別的,用的是SP和MMC。

 5

 目的蛋白和雜蛋白分子量都是50-500kd要怎么選???

如果雜蛋白和目的蛋白分子量相差不大,那么分子篩產(chǎn)品是無(wú)法分離的,可以選擇親和,離子交換或者疏水填料。

 6

 賽默飛有款Pierce Zeba快速脫鹽產(chǎn)品,你們的填料能這么用嗎?

我們的用不了。賽默飛這款相當(dāng)于超濾離心管。通過(guò)離心對(duì)蛋白溶液進(jìn)行置換,以達(dá)到脫鹽換液的目的。我們的如果這樣操作,填料會(huì)流干,蛋白濃度就會(huì)很大,蛋白析出或者變性都有可能。而且該操作可能把填料的孔都堵住,所以不能這么操作。

 7

 咨詢(xún)脫鹽柱G25填料?

建議推薦30pg,G25分子篩干粉,分離范圍是1k-5k,葡聚糖聚合是第一代分子篩,試用前要煮沸成濕膠狀態(tài)。而30pg是濕膠狀態(tài),分離范圍是可以,葡聚糖和纖維素具有一定的剛性,屬于第二代分子篩??梢試L試,

 8

 螯合好的鎳柱填料有哪些及其使用范圍?

鎳柱有三款填料,IDA、IMAC、TED,具體內(nèi)容請(qǐng)參看最新產(chǎn)品手冊(cè)第26-27頁(yè),一般推薦是常規(guī)粒徑的.

 9

 請(qǐng)問(wèn)硬膠和軟膠有什么區(qū)別?

硬膠主要是耐壓比較大,效率高一些,但純化過(guò)程對(duì)生物活性影響比較大,非特異性吸附,而軟膠反壓較小,可保持生物活性。

 10

 一般用離子填料耐高壓,有沒(méi)有合適的填料能夠替換GE的30Q???

小分子核甘酸純化耐壓大概5bar等,推薦我們的Q-HPR能對(duì)標(biāo)進(jìn)口,這款填料平均粒徑是37μm,耐壓是5bar,可以嘗試。

 11

 之前購(gòu)買(mǎi)預(yù)活化NHS偶聯(lián)效果不太好有沒(méi)有其他合適的填料推薦?

一般推薦客戶(hù)使用CNBr填料,主要CNBr和NHS偶聯(lián)的官能團(tuán)是氨基,但前者偶聯(lián)量更大一些,效果也更好一些。

 12

 工藝開(kāi)發(fā)的時(shí)候樣品在高鹽條件下選擇疏水填料,或者  陽(yáng)離子填料嘗試,但效果不太好怎么辦?

可以嘗試多模式層析填料摸索合適的洗脫條件。

 13

 小鼠IgM用NHS這個(gè)填料偶聯(lián)蛋白的比例是多少呀?

分子量越大的偶聯(lián)量越低,建議1-3mg(IgM)/ml(NHS)

 14

 想找一款鎳柱填料,之前使用的粒徑是FF,容易堵塞孔載量不高?

我們公司可以根據(jù)樣品的實(shí)際情況做定制化填料,建議使用大顆粒填料如Ni-IDA-BB來(lái)避免出現(xiàn)堵塞。

 15

 分子篩分離效果不太好是什么原因?

1、目標(biāo)蛋白和雜質(zhì)的分子量差異比較小2、裝柱高度在60cm,純化組分分離一般上樣量控制在5%以?xún)?nèi),組群分離控制在30%。

 16

 親和鎳純化原核胞外蛋白選擇高分辨率,重力柱可以裝這款填料嗎?

1、重力柱一般選擇Ni-IMAC-FF,平均粒徑90μm,HP的平均粒徑是37μm,小粒徑分辨率高,同時(shí)反壓也比較大,一般重力柱選擇90μm的。

 17

 客戶(hù)之前用了一下我們的Q柱和Ni柱,都出現(xiàn)了填料發(fā)紅的情況,可以洗掉嗎?

填料本身是沒(méi)有紅色的物質(zhì),確認(rèn)一下樣品中是否有紅色的雜質(zhì)吸附在微球上,如酚紅或色素等。如果是吸附的雜質(zhì),可以嘗試用高鹽清洗一下。如果還不行,可以嘗試用8M尿素或者1M氫氧化鈉+30%異丙醇清洗。

 18

 DEAE-6FF填料使用過(guò)程中,由于樣品中有添加低濃度的錳離子,在堿處理過(guò)程中填料顏色變黑了怎么辦?

1.將填料用1M HCl浸泡處理24h,然后用純化水洗膠至接近中性,但檢測(cè)結(jié)果顯示離子載量合格,但蛋白載量?jī)H為合格載量的50%;2.為預(yù)防填料變黑,可在2M NaCl處理過(guò)后,用純化水沖洗柱子10個(gè)柱體積以上,再用0.5M NaOH處理。

 19

我們的30PG和75PG產(chǎn)品一般都能做多少次?

沒(méi)有具體驗(yàn)證過(guò),分子篩和離子交換產(chǎn)品,理論上是可以使用300-500次,實(shí)際上是200次左右,親和填料,理論使用次數(shù)是150-200次,實(shí)際上100次左右。具體使用次數(shù)主要還是看樣品清潔度和使用者的習(xí)慣及填料保養(yǎng)及清洗狀態(tài)。

 20

 什么是嗜硫吸附?Plasmid對(duì)閉環(huán)DNA是嗜硫吸附嗎?為什么該填料對(duì)開(kāi)環(huán)DNA不吸附?

很多個(gè)堿基組成DNA鏈,鏈與鏈之間通過(guò)二硫鍵結(jié)合。我們這個(gè)Plasmid填料就是作用在二硫鍵上的。開(kāi)環(huán)DNA的二硫鍵被打開(kāi)了,所以填料Plasmid不能吸附開(kāi)環(huán)DNA。

 21

 怎樣去除樣品中的色素?

1.30PG脫鹽柱處理。2.Q柱,結(jié)合模式。3.SP柱,流穿模式。

 22

 直徑450的,柱高28cm 可以做G25脫鹽柱嗎?上樣量呢?

可以做脫鹽柱,不過(guò)建議不要裝太高,裝太高了流速會(huì)很慢,建議不超過(guò)20cm。上樣量研發(fā)階段30%,生產(chǎn)級(jí)別20-25%。

 23

 1.請(qǐng)問(wèn)EAH的15個(gè)原子間隔臂是peg形式的還是烷基? 2.請(qǐng)問(wèn)NHS填料用普通異丙醇保存就可以了嗎?3.G75 和75PG這兩個(gè)性質(zhì)有什么差異嗎?

1.親水鏈。2.沒(méi)用過(guò)的可以。3.G75原材料是葡聚糖,75PG原材料是瓊脂糖+葡聚糖+纖維素

 24

 1.溴化氫填料時(shí)間長(zhǎng)了,結(jié)合抗原能力下降?2.蛋白液中含有尿素,對(duì)填料的偶聯(lián)影響有多大?3.4FF的孔徑是多少?

1.6個(gè)月后載量會(huì)降低30%-40%。2.確保偶聯(lián)時(shí)的 pH 和鹽濃度與 B 液一致:0.2M NaHCO3、0.5 M NaCl,調(diào)節(jié) pH 8.3(如果要偶聯(lián)的生物分子為 IgG 時(shí),pH=8.5-9.0),室溫保存。3.數(shù)字4和6代表含糖量,含糖量越低,孔徑越大,4FF,4BB,孔徑是80nm左右,6FF,6BB,孔徑是50nm左右。

 25

 抗菌肽純化,等電點(diǎn)是11.17,求推薦合適的純化方案?

等電點(diǎn)大于6,基本是選擇陽(yáng)離子填料,陽(yáng)離子填料上帶負(fù)電荷。層析填料分為四大類(lèi),凝膠過(guò)濾,離子交換,親和,疏水。
親和的不適合您的項(xiàng)目,成本太高。
凝膠過(guò)濾,一般是實(shí)在沒(méi)有別的層析純化方案,才會(huì)選擇這一種,優(yōu)勢(shì)是純度和收率比較高,劣勢(shì)也很明顯,上樣量只有5%,而且裝柱高度有明確的要求,放大生產(chǎn)的時(shí)候,需要選擇更高配置的層析設(shè)備。
就只剩下離子交換和疏水層析了。

 26

 Ni柱是每次用完后都要清洗再生嗎?(上樣后,淋洗的時(shí)候,5ml/min的流速,柱壓在0.22)

最好是每次洗脫結(jié)束后都重新再生一次,如果樣品比較干凈,3-5次后,再掛鎳重生也可以。如果不再生,洗脫后用純水洗,然后再過(guò)平衡液,再用20%乙醇保存。如果到了生產(chǎn)級(jí)別,建議每使用一次,都清洗,可以增加填料的壽命。

 27

 Tris、EDTA和硫酸銨對(duì)Q Focurose HPR有影響嗎?過(guò)柱洗脫的樣品凝固了怎么辦,樣品中有硫酸銨,洗脫液有1M氯化鈉。

Tris和EDTA影響不用考慮,硫酸銨需要考慮濃度和pH對(duì)上樣或洗脫的影響。建議降低洗脫液的氯化鈉濃度為0.5M,洗脫液下來(lái)后馬上用不含氯化鈉的洗脫液稀釋?zhuān)ūWCpH與洗脫液一致)。另外,柱子要裝成矮胖子而不是細(xì)長(zhǎng)個(gè),防止因?yàn)橄疵撨^(guò)程中局部濃度過(guò)大導(dǎo)致蛋白析出。

 28

 MMC掛上不下來(lái),用2M,KCl都洗不下來(lái),有沒(méi)有別的洗脫方法推薦的,還有MMC上面是什么疏水配基?

MMC上是苯基疏水基團(tuán),洗脫液鹽濃度范圍是0.5M-2M,建議前期緩沖體系或者上樣體系調(diào)整,讓目的蛋白不要跟填料結(jié)合太緊。

 29

 客戶(hù)反映DEAE FF填料使用后經(jīng)堿處理顏色變黑是什么原因,該怎么處理?

DEAE FF是可以耐酸耐堿的,工作狀態(tài)下可以耐受pH 2-9,保存的話(huà),短期保存可以耐受pH 2-14,長(zhǎng)期保存可以耐受pH 2-12。
經(jīng)過(guò)與客戶(hù)溝通確認(rèn),懷疑是樣品中添加的硫酸錳殘留,遇到高濃度氫氧根離子所致。
有如下建議方案:
先嘗試用pH2-3的HCl或醋酸 以30cm/h的流速處理5CV,觀察看顏色是否有變化。

針對(duì)該種情況,處理方法可以按以下步驟來(lái):
1、樣品洗脫結(jié)束后,用純化水以60cm/h的流速處理5-10CV,清洗掉殘留的樣品和再生液(平衡液+1M NaCl);
2、用2M NaCl 以60cm/h的流速處理5CV,除去強(qiáng)離子結(jié)合的蛋白;
3、繼續(xù)用純化水 以60cm/h的流速處理10CV以上;
4、用0.2-0.5M NaOH 以30cm/h的流速處理5CV,除去一些疏水結(jié)合蛋白、沉淀物、脂蛋白等;
5、用純化水 以30cm/h的流速處理至接近中性;
6、最后用20%乙醇 以30cm/h的流速保存
以上過(guò)程如果方便,建議反向沖洗。

 30

 重力柱如何使用?

重力柱跟正常的層析相比,原理完全一樣,只是沒(méi)有檢測(cè)器的配合,所有的收集樣品全憑經(jīng)驗(yàn)。原則上,凝膠過(guò)濾三分之一柱體積收集樣品,收集2-3倍上樣量。其余掛柱的,換洗脫液后1個(gè)柱體積開(kāi)始收集,收2-3個(gè)柱體積。

  31

 離子交換條件怎樣設(shè)定?

陽(yáng)離子:pH值低于等電點(diǎn)0.5左右,掛柱模式;pH值高于等電點(diǎn)0.5左右,流穿模式。陰離子:pH值高于等電點(diǎn)0.5左右,掛柱模式;pH值低于等電點(diǎn)0.5左右,流穿模式。                            

  32

 蛋白純化過(guò)程中離子填料如何選擇?

根據(jù)蛋白的等電點(diǎn),如果蛋白等電點(diǎn)在8左右,采取陽(yáng)離子掛柱陰離子流穿模式。如果蛋白等電點(diǎn)在6左右,就反過(guò)來(lái),采用陰離子掛柱陽(yáng)離子流穿。掛柱的可以考慮用復(fù)合填料MMC或MMA代替。一般都需要用兩根柱子,一陰一陽(yáng),一個(gè)掛柱模式一個(gè)流穿模式。

 33

 預(yù)活化介質(zhì)偶聯(lián)配基時(shí),偶聯(lián)時(shí)間如何確定?

偶聯(lián)時(shí)間要根據(jù)實(shí)際反應(yīng)情況跟蹤控制。一般以上清液中,待偶聯(lián)物質(zhì)濃度不再減小作為偶聯(lián)完成的根據(jù)。拿蛋白來(lái)說(shuō),即為上清液UV280值不再有明顯的降低,即可認(rèn)為偶聯(lián)過(guò)程已經(jīng)完成。

 34

 Ni-IDA或者是Ni-IMAC,使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)填料變成棕褐色是什么原因?

是因?yàn)樘盍仙系腘i脫落,并在堿性環(huán)境中發(fā)生化學(xué)反應(yīng)生成氫氧化鎳沉淀所致。一般可以用0.1M的EDTA緩慢沖洗兩小時(shí)以求復(fù)原。

 35

    填料該如何保存?

親和填料,一般2-8度保存,其余填料,室溫陰暗保存。不能凍結(jié)。一旦結(jié)冰凍結(jié),復(fù)融時(shí)填料基質(zhì)有可能會(huì)破碎。



                                                                                        樣品處理與檢測(cè)方面

序號(hào)

客戶(hù)問(wèn)題

匯研答案

 1

 之前用你們匯研的proteinA和G兩種試用裝對(duì)人的血液抗體A進(jìn)行純化,用平衡液一沖就全出來(lái)了,后面再用洗脫液洗脫的時(shí)候不出峰了,上樣1ml,緩沖液PB的PH7.4,流速0.5ml/min,儲(chǔ)存溶液用的PH7.2的PB,鹽濃度用的0.02M,是什么原因?qū)е碌模?/span>

 出現(xiàn)這種情況可能有這幾個(gè)原因:1.1ml的樣品中對(duì)應(yīng)的抗體濃度大約6.9至7mg/ml的話(huà),人血清中純化抗體濃度和量較低,洗脫液中抗體濃度低于檢測(cè)下限,建議人血清樣品增加上樣倍數(shù)至40倍以上(稀釋后的上樣體積,人血清體積3-5倍) 2.確認(rèn)一下樣品上樣前的條件,主要是PH和電導(dǎo),建議用平衡液稀釋10倍以上,復(fù)測(cè)PH和電導(dǎo)的差異(平衡液稀釋后PH和電導(dǎo)差異較小,不用調(diào)整)

 2

 我們的樣本含有40mM咪唑可以上離子交換柱嗎?用的你們匯研的SP,樣本含有40mM咪唑,1mMPMSF,1mM-EM,2mMDTT,這個(gè)帶10個(gè)his標(biāo)簽的蛋白超聲時(shí)得有500mM鹽,一定要先透析掉鹽再上柱嗎?

1 、高鹽對(duì)于超聲破碎的影響比較小,主要是看蛋白的穩(wěn)定性。所以關(guān)注點(diǎn)不是高鹽超聲破碎,而是上柱的填料對(duì)送溶液電導(dǎo)的要求,例如,過(guò)SP預(yù)裝柱,可以低鹽超聲破碎也可以高鹽超聲破碎,但是上樣前需要檢測(cè)電導(dǎo),如果高于10mS/cm,需要對(duì)樣品緩沖液置換透析或直接加上柱平衡液進(jìn)行稀釋電導(dǎo)至10mS/cm以下。

2、超聲后用上清還是沉淀復(fù)溶上樣,取決于目標(biāo)物是在上清還是沉淀,初次實(shí)驗(yàn)或不確定時(shí),建議上清和下層沉淀分別取樣電泳,確定目標(biāo)物在上清還是沉淀中。
目標(biāo)物在上清表達(dá)是可溶的,在下層沉淀是表達(dá)包涵體,需要用尿素或鹽酸胍溶解后上樣,純化后復(fù)性。

 3

 我們是做DNA聚合酶的表達(dá)純化,目前是用鎳柱進(jìn)行純化,純化后純度很純,基本只有一條目的蛋白,然后過(guò)肝素柱子的目的是想把基因組DNA去除,但是過(guò)完肝素柱子除了目的蛋白,還出現(xiàn)了疑似目的蛋白的二聚體,而且只用肝素柱子一步純化,純度差,還有一個(gè)問(wèn)題是用肝素柱子的時(shí)候好多蛋白不掛柱,你們匯研有這方面的例子嗎?我們的目標(biāo)蛋白是DNA聚合酶,理論上是結(jié)合肝素的,這方面優(yōu)化平衡液和樣品填料能實(shí)現(xiàn)最終純化嗎?

  肝素是親和填料,只對(duì)特定目標(biāo)物結(jié)合,不是所有蛋白都結(jié)合,如果目標(biāo)物不結(jié)合或結(jié)合量很少,需要優(yōu)化平衡液和樣品的條件,讓樣品和填料充分結(jié)合??梢缘?,但是看客戶(hù)的純度要求,純度要求非常高的話(huà)還是建議兩步或兩步以上純化。

 4

 我們用的桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng),之前掛柱效果不理想,這次將His標(biāo)簽長(zhǎng)度增加到10個(gè)了,這種情況推薦哪一款鎳柱呀?之前用過(guò)GE的填料,普通的那種,也用過(guò)你們匯研的耐EDTA的那種預(yù)裝柱TED。

 TED的載量最低,但是耐EDTA。如果可以用普通的Ni柱,不需要耐EDTA的話(huà),可以用IMAC試試。

 5

 在細(xì)胞里擴(kuò)增病毒,如何能更好的和細(xì)胞成分分離開(kāi)?離心的時(shí)候有很多病毒被帶到沉淀里


  如果有遇到很多病毒被帶到沉淀里,且病毒濃度不大的話(huà),那么可能是在由感染細(xì)胞或組織勻漿中提取病毒時(shí),由于與病毒大小相近的細(xì)胞亞單位及碎片的存在,導(dǎo)致提純效果不理想。
有看到類(lèi)似情況的,可以嘗試差速離心法。
原理是:不同大小和比重的粒子在沉降速度上存在差別,沉降速度差別(相差)在一個(gè)或幾個(gè)數(shù)量級(jí)的粒子,可用差速離心法分離提取待純化的病毒。

  簡(jiǎn)單說(shuō),是將被分離的樣品交替進(jìn)行低速離心與高速(或超速)離心。差速離心適用于從組織培養(yǎng)液、雞胚尿囊液或經(jīng)過(guò)紅細(xì)胞吸附-釋放的病毒懸液中提純病毒。
具體做法是:以差速離心法分離提純病毒時(shí),經(jīng)常以低速 (2000~3000r/min,20~30min) 及中速(10000 r/min,20~30min) 去除較大的宿主細(xì)胞碎片、污染的細(xì)菌及其它較大的雜質(zhì)。然后,選擇在60min內(nèi)能夠沉淀80%以上的病毒粒子的較高速度,離心 1~2h使病毒沉淀。

 6

 DNA聚合酶純化后,要檢測(cè)這個(gè)基因組DNA殘留,該怎么檢測(cè)?


定性的話(huà)就用DNA電泳試試,定量就麻煩些,用同位素法或者做熒光定量pcr。

 7

 G50和G75 這幾款葡聚糖配合重力柱試用,需要額外加壓?jiǎn)幔?/span>

  重力柱不能加壓,用重力柱做G75一類(lèi)的這些東西的拖延或者緩沖液置換,就是算體積的,核心的思想就是你的樣品的進(jìn)去測(cè),你看好柱體積,1/3個(gè)柱體積開(kāi)始收集,就是1/3柱體積開(kāi)始出峰,理論就是這樣子。如果你的柱子是四毫升,那就是3.3毫升,你下面看到過(guò)了3.3毫升之后開(kāi)始收,大概收個(gè)幾毫升吧,可以首兩個(gè)至一個(gè)體積左右,你上樣量大概翻個(gè)三倍左右,你上一毫升就收三毫升以上,兩毫升就收六毫升,差不多就是這樣一個(gè)范圍,重力柱的話(huà)完全就是憑經(jīng)驗(yàn)做的,沒(méi)有任何檢測(cè)就是在線(xiàn)檢測(cè)的。

 8

 1,將高親和力的單抗偶聯(lián)到填料中,純化樣品中的特異性蛋白,請(qǐng)問(wèn)你們匯研目前有沒(méi)有做過(guò)中試規(guī)模的例子可供分享?2.人源化抗體好偶聯(lián)嗎?3.這種偶聯(lián)填料都裝多大的柱子,如果處理樣品量比較大,你們能不能做?

 我們有做過(guò)納米抗體偶聯(lián)的項(xiàng)目,做過(guò)幾十升中試規(guī)模的。您那邊方便的可以把抗體寄過(guò)來(lái),我們幫您偶聯(lián),可能前期要做一個(gè)基質(zhì)微球的篩選。

 9

 豬腹瀉全病毒純化:1.滅活前還是滅活后純化?2.收率多少,檢測(cè)方法是什么?3.色素問(wèn)題?

1.兩種方式都有,要根據(jù)具體的工藝具體安排。2.兩種純化方案收率不同,要根據(jù)自己的產(chǎn)品情況選擇。檢測(cè)方法是客戶(hù)提供的,不方便透露。3.色素是后洗脫出來(lái)的。

 10

 病毒被帶到沉淀里怎能辦?

 如果有遇到很多病毒被帶到沉淀里,且病毒濃度不大的話(huà),那么可能是在由感染細(xì)胞或組織勻漿中提取病毒時(shí),由于與病毒大小相近的細(xì)胞亞單位及碎片的存在,導(dǎo)致提純效果不理想。
有看到類(lèi)似情況的,可以嘗試差速離心法。具體做法是:以差速離心法分離提純病毒時(shí),經(jīng)常以低速 (2000~3000r/min,20~30min) 及中速(10000 r/min,20~30min) 去除較大的宿主細(xì)胞碎片、污染的細(xì)菌及其它較大的雜質(zhì)。然后,選擇在60min內(nèi)能夠沉淀80%以上的病毒粒子的較高速度,離心 1~2h使病毒沉淀。

 11

 怎樣鑒定樣品中的二聚體?

 用我們的分子篩填料,分辨率不夠很難鑒定出來(lái)。建議用HPLC,根據(jù)分子量范圍選擇一根合適的分子篩柱子,在目標(biāo)蛋白峰前面出的小峰即為二聚體。




                                                                                         裝柱方面

   序號(hào)

  客戶(hù)問(wèn)題

 匯研答案

    1

  

 柱子出現(xiàn)漏液是什么原因? 


 閥門(mén)、密封圈沒(méi)擰緊,管路破損

    2

  

 凝膠出現(xiàn)裂縫是什么原因? 


 氣泡進(jìn)入層析柱,需重裝

    3

  

 柱子分辨率降低,分離效果不好是什么原因?


 柱效不合格; 流速過(guò)快(30cm/h); 上樣量過(guò)大(組群分離≤30%、精細(xì)分離 ≤0.5

-4.0%); 層析柱使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng),凝膠出現(xiàn)結(jié)塊需重裝

    4

 

 凝膠發(fā)黃是什么原因? 


 使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng); 清洗不夠徹底 (1M NaOH/2%  Triton X100/20%乙醇/30%異丙醇等清洗)

    5


 峰形圖前傾/拖尾是什么情況? 


 前傾(AS<1.0):過(guò)緊;拖尾:過(guò)松(AS>1.0)

    6

 

  反壓過(guò)大是什么原因? 


 凝膠堵塞; 層析系統(tǒng)管路/進(jìn)樣頭/在線(xiàn)過(guò)濾器堵 塞; 裝柱過(guò)緊; 凝膠破碎;


地址:武漢市東湖開(kāi)發(fā)區(qū)高新二路388號(hào)光谷國(guó)際生物醫(yī)藥企業(yè)加速器C11棟20層

電話(huà):027-87772229

郵箱:huiyanbio@126.com

微信公眾號(hào)

匯研手機(jī)站

在線(xiàn)咨詢(xún)
電話(huà)咨詢(xún)
在線(xiàn)留言
微信客服

返回頂部
苍井空大战黑人巨大喷水 | 欧美一区二区囗爆吞精合集 | 久久精品国产999大香线蕉 | 一级丰满老熟女毛片AV | 亚洲中文字幕在线蜜乳91 | 美女网站视频黄下载 | 亚洲熟妇色自偷自拍另类 | 中文字幕无码久久精品青草 | 2020天天谢天天吃天天 | 人妻少妇被粗大爽中文视频 | 无码人妻精品一区二区三区千菊 | 国产丰满妇女爆乳A片91 | 农村妇女大BA片免费 | 亚洲 国产 另类视频 | 黄片一区二区三区四区五区六区七区 | 人妻精品久久久久中文字幕一区 | 国产裸体美女无遮挡永久免费观看 | 午夜国产A久久片亚洲最大 精品秘 无码一区二区三区 | 国产毛片精品区色欲黄A片 州产精无码久久久久久高潮 | 欧美精品福利在线观看 | 寡妇高潮一级毛片免费我的闺 | 国产成人无码一区二区在线 | 99精品最新在线8 | 无码三级午夜久久人妻 | 日韩精品无码高清视频看看 | 国产三级黄色性感毛片大全 | 国产一级二级三级电影 | 无码一区二区三区瑜伽视频 | 中文字幕永久在线视频 | 国产偷窥熟女精品视频大全 | 全免费A级毛片免费看黄瓜视频 | 黄色视频网站在线下载观看 | 国产精品无码一区二区桃花视频 | 免费一级全黄少妇性色生活片 | 风流少妇妇A片麻豆 | 欧美成人午夜无码A片秀色直播 | 国产极品国模粉嫩小泬 | 老女人任你躁久久久久久老妇 | 偷窥国产肥熟女一区二区 | 黄色三级片黄色一级片 | 黄色视频免费在线播放 |